如何做细菌培养基。详细材料及步骤有那些 ?

游戏攻略011

如何做细菌培养基。详细材料及步骤有那些 ?,第1张

如何做细菌培养基。详细材料及步骤有那些 ?
导读:先将标本接种于固体培养基上,做分离培养。再进一步对所得单个菌落进行形态、生化及血清学反应鉴定。培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。一般细菌可在有氧条件下,37℃中放18~24小

先将标本接种于固体培养基上,做分离培养。再进一步对所得单个菌落进行形态、生化及血清学反应鉴定。培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。一般细菌可在有氧条件下,37℃中放18~24小时生长。厌氧菌则需在无氧环境中放2~3天后生长。个别细菌如结核菌要培养1个月之久。

由于细菌无处不在,因此从制备培养基时开始,整个培养过程必须按无菌操作要求进行,否则外界细菌污染标本,会导致错误结果;而培养的致病菌一旦污染环境,就会引起交叉感染。

以疾病诊断为目的进行的培养,要选择合适的标本(血、尿、便、脓液、分泌物等),并应结合临床情况解释所得结果。

直接使用普通的加富培养基就可以了。教你你个简单的,家里做的办法,就是让你妈给你做个很浓的勾芡,然后里面不要加盐,加上少量肉汁和菜汁(不要太多)稍微凉后就会成为胶状,这样在空地敞口放一两天,就会长菌了。如果不能凝固,买些果冻粉,加热后加进去就行。

你好,口袋妖怪日月中,基格尔德最终合成是群聚变形特性的50%形态基格尔德,需要全部的100个细胞 如果细胞不足,最多只能合成50%形态的气场破坏特性的基格尔德。

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基格尔德作为神兽是没有进化形态的,也许你从TV版里看到了走细胞、核心、10、50、完备形态,但是那不是进化,游戏里也没有做出来,进化除了mega都是不可逆的,但。

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1/7 1基格尔德分为核心形态(0%)、10%形态、50%形态、100%完全体形态共4种形态。 2/7 2合成道具分为:①z1红色细胞 ②z2蓝色细胞 ③普通细胞 3/7 3合成方法在精。

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在究极日月中,基格尔德其实是没有进化的。 该宝可梦的各种不同的样子其实都是同一只宝可梦的不同形态。 玩家需要在游戏内收集大量的细胞来进行合成,合… 在。

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A培养基,格尔德的话我感觉是挺简单的,你想要培养这个基格尔德,你正常情况下就是你必须获得那个啊超进化石,然后你想培养她可以加一些他的特征之类的东西。 A培。

培养基:最简单,最常用的就是细菌肉汤培养基培养基,也称LB培养基。听这个名字,顾名思义,就是绝大多数的可培养细菌(还有不可培养细菌,或者称未培养细菌,自然界中仅有1%不到的细菌能被我们培养出来)都能在这个培养基上培养出来。

LB的好处是能培养绝大多数可培养细菌,但是他的确定是没有初步鉴定能力,如果需要初步鉴定的话可以选择一些显色培养基

培养方法,一般情况下分需氧和厌氧两种;

下面简述需氧型细菌培养:

将你要培养细菌的器材、试剂、培养基等拿去灭菌(是灭菌不是消毒)并烘干;然后准备超净工作台,酒精棉等,将要培养的细菌用移液器(液体保种)、灭菌牙签、接种环等物(注意不要用手直接拿)接种到培养基中。液体和半液体培养基正置培养,固体培养基倒置培养。放入培养箱中。

氯化钙法(Calcium Chloride)

本方法适用于批量制备大肠杆菌感受态细胞,所得感受态细胞可以获得5 x 106 到 2x 107 转化克隆/微克超螺旋质粒DNA

材料(MATERIALS)

缓冲液和溶液(Buffers and Solutions)

(冰冷的)CaCl2•2H2O (1 M)

冰冷的MgCl2-CaCl2 s溶液(solution, ice cold)

培养基(Media)

用于初始培养物培养的LB肉汤(L-broth for initial growth of culture)

LB agar plates containing appropriate antibiotic

核酸(Nucleic Acids)

质粒DNA (Plasmid DNA)

或经过重组的质粒(recombinant plasmid)

方法

1从37°C过夜(16-20 hours)培养平皿内挑取一个直径约为2到3毫米的单菌落。把这样的单菌落接种于一只装有5毫升LB肉汤的30毫升灭菌试管中,于37°C下振荡培养过夜。2 转移02毫升过夜培养物于一只装有15或20毫升LB的50毫升灭菌三角瓶中 于37°C下振荡培养2到25小时(此时细菌处于对数生长期)。

3 室温下,4000 rpm离心5分钟收集对数期细胞。 弃培养基,保留细胞沉淀。

5 加入10毫升冰冷的MgCl2-CaCl2 溶液,并轻微打匀。

6 4°C下,4000 rpm离心10分钟收集细胞。

7 弃MgCl2-CaCl2 溶液,保留细胞沉淀。

8 加入08毫升(每25毫升初始培养物加入1毫升)冰冷的01M的CaCl2 溶液,并轻微打匀。冰浴放置若干小时为最好。

9 此时的感受态细胞可以依照下面的步骤10到16直接进行转化操作,也可以分装,加入甘油后于-70°C冰冻保藏。

10 向事先灭菌,并经冷处理的15ml 聚丙烯管中转移100微升感受态细胞悬浮液。向每个转化管中加入DNA(一般含量是10微升或更低的体积中所含量应不超过50纳克)。细心混匀管中成份。于冰浴放置30到40分钟。

11 把转化管转移至放于42°C循环水浴锅中预热的试管架上,准确计时90秒。(此时不能摇动转化管)

12 把试管迅速转移至冰浴2到3分钟。

13 向每只试管中加入500微升LB肉汤。37°C放置45到90分钟,以使细菌复原,并容许质粒所编码的抗生素抗性的表达。

14 转移适量体积(如果使用90毫米平板,一半涂布量不应超过100微升)的经转化处理的感受态细胞涂布于含有 相应抗生素的LB-琼脂平板上。

15 室温放置平板直到其上液体被吸收。

16 于37°C倒置平板培养。转化克隆应该于12-16 小时区间出现。

1、采用全自动血液培养仪(BacT/ALERT 3D)进行需氧和厌氧培养并分离菌株。

2、看瓶身标注的字体,含量蓝绿色盖子为需氧瓶,而红紫色盖子为厌氧瓶。

血培养的临床意义:血培养是采集患者血液标本并接种到培养瓶中,用以发现、识别引起菌血症或真菌血症的病原微生物,是诊断菌血症和真菌血症的基本而重要的方法。血培养结果对感染性疾病的诊断、治疗和预后都有极为重要的临床意义。

扩展资料:

作用:

了解引起菌血症的不同途径有助于诊断和解释血培养结果。菌血症通常来源于以下部位的感染,其中泌尿生殖道为25%,呼吸道为20%,脓肿为10%,外科伤口为5%,胆道感染为5%,其他已知部位的感染为10%,未知部位的感染为25%。

采血量和血培养的数量

采血量:对从菌血症或真菌菌血症病人血培养中获得的微生物,每个培养瓶抽取的血量是唯一重要的变量。对婴幼儿和儿童,一般采血1~5ml用于血培养。成人血培养的标本量为10ml,血液和肉汤比一般推荐为1:5~10。

血培养的数量:血培养的数量和采血时间关系到菌血症的病理生理学,一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养。一般而言,采集血培养都应该在使用抗生素之前进行,推荐同时采集2~3份血。

-血培养

-血培养基

一般来说,植物培养使用固体培养基,所以里面需要加入琼脂,一般每升加入6到8克琼脂粉即可(培养基pH会影响琼脂凝固效果,低了不易凝固,高了则过硬,一般在5-8之前问题不是太大)。此外,培养基中需要加入碳源,一般使用蔗糖或者葡萄糖。最后,植物培养基中还需要无机物,比如钙离子,钾离子等等,也有的培养基中需要加入维生素和肌醇等物质。当然,不同的植物以及不同的培养目的使用的培养基是不同的。

(1)配制MS大量元素母液 一般将大量元素分别配制成100倍的母液,使用时再分别稀释100倍。 分别称取 NH4NO3 165g KH2PO4 17g KNO3 190g CaCl2·2H2O 44g MgSO4·7H2O 37g 各自配成1L的母液。倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。 (2)配制MS微量元素母液 一般将微量元素配制成100倍母液。 依次称取 KI 0083g Na2MoO4·2H2O 0025g H3BO3 062g CuSO4·5H2O 00025g MnSO4·H2O 169g CoCl2·6H2O 00025g ZnSO4·7H2O 086g 配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。 CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小,如果天平精确度没有达到万分之一,可先配成调整液。 分别称取 CuSO4·5H2O 005g CoCl2·6H2O 005g 各自配成100ml的调整液,然后取5ml就还有00025g的量。 (3)配制MS有机母液 一般配制成100倍MS有机母液。 依次称取 肌醇 10g 盐酸硫胺素(VB1) 001g 烟酸 005g 甘氨酸 02g 盐酸吡哆醇(VB6) 005g 配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。 (4)配制MS铁盐母液 一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 373g FeSO4·7H2O 278g 配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液,加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液,共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制,不能混合在一起,生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解,细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解,然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。 2、配制培养基 以配置1L MS培养基为例,按顺序进行如下操作: (1)先在烧杯中放入一些蒸馏水。 (2)分别取上面八种母液10ml倒入。 (3)一般称取30g蔗糖倒入,搅拌溶解。 (4)加蒸馏水用量筒定溶至1L。 (5)按设计好的方案添加各种激素,由于激素的用量很小,而且激素对组培植物的生长至关重要。所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取,减少误差。 (6)用精密试纸或酸度计调整PH至57-58。(有条件的话使用酸度计,比较精确) 可配1当量的HCL和1当量的NaOH用来调溶液PH值。 1当量HCL配制:用量筒量取83ml配成100ml溶液。 1当量NaOH配制:称取NaOH 4g 配成100ml溶液。 (7)称取5g左右琼脂粉(质量好的琼脂粉),倒入上面配好的溶液中,放在电炉上加热至沸腾,直到琼脂粉熔化。 (8)稍微冷却后,分装入培养容器中。无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口,用橡皮筋或绳子扎紧。 (9)放入消毒灭菌锅灭菌,灭菌20分钟左右。 (10)灭菌后从灭菌锅中取出培养基,平放在实验台上令其冷却凝固。

二、灭菌

  灭菌是组织培养重要的工作之一。初学者要清楚有菌和无菌的范畴。有菌的范畴是:凡是暴露在空气中的物体,接触自然水源的物体,至少它的表面都是有菌的。依此观点,无菌室等未处理的地方、超净台的表面、简单煮沸的培养基、我们使用的刀、剪在未处理之前、我们身体的整个外表及与外界相连的内表,如整个消化道、呼吸道,即我们呼出的气体、培养容器无论洗得多干净等等都是有菌的。 这里所指的菌,包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其他微生物。菌的特点是:极小,肉眼看不见。无处不在,无时不有,无孔不入。在自然条件下忍耐力强,生活条件要求简单,繁殖力极强,条件适宜时便可大量滋生。 无菌的范畴是:经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体,经其他物理或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法必须已经证明是有效的),高层大气、岩石内部、健康的动、植物的不与外部接触的组织内部,强酸强碱,化学元素灭菌剂等表面和内部都是无菌的。从以上可以看出:在地球表面无菌世界要比有菌世界小的多。 灭菌是指用物理或化学的方法,杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体,即把所有生命的物质全部杀死。与此相关的一个概念是消毒,它指杀死、消除或充分抑制部分微生物,使之不再发生危害作用,显然经过消毒,许多细菌芽孢、霉菌厚垣孢子等不会完全杀死,即由于在消毒后的环境里和物品上还有活着的微生物,所以通过严格灭菌的操作空间(接种、超净台等)和使用的器皿,以及操作者的衣着和手都不带任何活着的微生物。在这样的条件下进行的操作,就叫做无菌操作。 植物组织培养对无菌条件的要求是非常严格的,甚至超过微生物的培养要求,这是因为培养基含有丰富的营养,稍不小心就引起杂菌污染。要达到彻底灭菌的目的,必须根据不同的对象采取不同的切实有效的方法灭菌,才能保证培养时不受杂菌的影响,使试管苗能正常生长。 常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类,即:物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施;化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用。 1、培养基用湿热灭菌 培养基在制备后的24小时内完成灭菌工序。高压灭菌的原理是:在密闭的蒸锅内,其中的蒸汽不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅内温度也随之增加。在01MPa的压力下,锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 注意完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底。高压灭菌放气有几种不同的做法,但目的都是要排净空气,使锅内均匀升温,保证灭菌彻底。常用方法是:关闭放气阀,通电后,待压力上升到005MPa时,打开放气阀,放出空气,待压力表指针归零后,再关闭放气阀。 关阀再通电后,压力表上升达到01MPa时,开始计时,维持压力01-015MPa,20分钟。 按容器大小不同,保压时间有所不同,见表。该表所列数字是彻底灭菌很保险的数字,如果容器体积较大,但是放置的数量很少,也可以减少时间。

三、接种

  接种时由于有一个敞口的过程,所以是极易引起污染的时期,这一时期主要由空气中的细菌和工作人员本身引起,接种室要严格进行空间消毒。接种室内保持定期用1%-3%的高锰酸钾溶液对设备、墙壁、地板等进行搽洗。除了使用前用紫外线和甲醛灭菌外,还可在使用期间用70%的酒精或3%的来苏儿喷雾,使空气中灰尘颗粒沉降下来。无菌操作可按以下步骤进行: (1)在接种4小时前用甲醛熏蒸接种室,并打开其内紫外线灯进行杀菌; (2)在接种前20分钟,打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯; (3)接种员先洗净双手,在缓冲间换好专用实验服,并换穿拖鞋等; (4)上工作台后,用酒精棉球搽拭双手,特别是指甲处。然后搽拭工作台面; (5)先用酒精棉球搽拭接种工具,再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍,然后反复过火尖端处,对培养皿要过火烤干; (6)接种时,接种员双手不能离开工作台,不能说话、走动和咳嗽等; (7)接种完毕后要清理干净工作台,可用紫外线灯灭菌30分钟,若连续接种,每5天要大强度灭菌一次。 接种是将已消毒好的根、茎、叶等离体器官,经切割或剪裁成小段或小块,放入培养基的过程。现将接种前后的程序连贯地介绍。 无菌接种步骤: (1)将初步洗涤及切割的材料放入烧杯,带入超净台上,用消毒剂灭菌,再用无菌水冲洗,最后沥去水分,取出放置在灭过菌的纱布上或滤纸上。 (2)材料吸干后,一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀,对材料进行适当的切割。如叶片切成05cm平方的小块;茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含1-2片幼叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械,防止交叉污染。 (3)用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或放置到培养基上。具体操作过程(以试管为例)是:先解开包口纸,将试管几乎水平拿着,使试管口靠近酒精灯火焰,并将管口在火焰上方转动,使管口里外灼烧数秒钟。若用棉塞盖口,可先在管口外面灼烧,去掉棉塞,再烧管口里面。然后用镊子夹取一块切好的外植体送入试管内,轻轻插入培养基上。若是叶片直接附在培养基上,以放1-3块为宜。至于材料放置方法除茎尖、茎段要正放(尖端向上)外,其他尚无统一要求。接种完后,将管口在火焰上再灼烧数秒种。并用棉塞,塞好后,包上包口纸,包口纸里面也要过火。

四、培养

  培养指把培养材料放在培养室(有光照、温度条件、无菌)里,使之生长,分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程。 1、培养方法 (1)固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。是现在最常用的方法。虽然该方法设备简单,易行,但养分分布不均,生长速度不均衡,并常有褐化中毒现象发生。 (2)液体培养法 即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。由于液体中氧气含量较少,所以通常需要通过搅动或振动培养液的方法以确保氧气的供给,采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养,其速度一般为50-100r/min,这种定期浸没的方法,既能使培养基均一,又能保证氧气的供给。