triz理论的40个发明创新原则是什么？

2024-02-22 08:54:48游戏攻略07

triz理论的40个发明创新原则是什么？,第1张

triz理论的40个发明/创新原则是什么？
导读：一、分割原则1、将物体分成独立的部分。2、使物体成为可拆卸的。3、增加物体的分割程度。二、拆出原则1、从物体中拆出"干扰'部分("干扰"特性)或者相反。2、分出唯一需要的部分或需要的特性。三、局部性质原则1、从物体或外部介质(外部作用)的一

一、分割原则

1、将物体分成独立的部分。

2、使物体成为可拆卸的。

3、增加物体的分割程度。

二、拆出原则

1、从物体中拆出"干扰'部分("干扰"特性)或者相反。

2、分出唯一需要的部分或需要的特性。

三、局部性质原则

1、从物体或外部介质(外部作用)的一致结构过渡到不一致结构。

2、物体的不同部分应当具有不同的功能。

3、物体的每一部分均应具备最适于它工作的条件。

四、不对称原则

1、物体的对称形式转为不对称形式。

2、如果物体不是对称的，则加强它的不对称程度，

五、组合原则

1、把相同的物体或完成类似操作的物体组合合起来。

2、把时间上相同或类似的操作联合起来。

六、多功能原则

1、一个物体执行多种不同功能，因而不需要其他物体。

七、‘玛特廖什卡'原则

1、一个物体位于另一物体之内，而后者又位于第三个物体之内，等等。

2、一个物体通过另一个物体的空腔。

八、重量补偿原则

1、将物体与具有上升力的另一物体结合以抵消其重量。

2、将物体与介质(最好是气动力和液动力)相互作用以抵消其重量。

九、预先反作用原则

1、如果按课题条件必须完成某种作用，则应提前完成反作用。

十、预先作用原则

1、预先完成要求的作用(整个的或部分的)。

2、预先将物体安放妥当，使它们能在现场和最方便地点立即完成所需要的作用。

十一、"予先放枕头"原则

1、以事先准备好的应急手段补偿物体的底可靠性。

十二、等势原则

1、改变工作条件，使物体上升或下降。

十三、"相反"原则

1、不实现课题条件规定的作用而实现相反的作用。

2、使物体或外部介质的活动部分成为不动的，而使不动的成为可动的。

3、将物体颠倒。

十四、球形原则

1、从直线部分过渡到曲线部分，从平面过渡到球面，从正六面体或平行六面体过渡到球形结构。

2、利用棍子、球体、螺旋。

3、从直线运动过渡到旋转运动，利用离心力。

十五、动态原则

1、物体(或外部介质）的特性的变化应当在每一工作阶段都是最佳的。

2、将物体分成彼此相对移动的几个部分。

3、使不动的物体成为动的。

十六、局部作用或过量作用原则

1、如果难于取得百分之百所要求的功效，则应当取得略小或略大的功效。此时可能把课题大大简化。

十七、向另一维度过渡的原则

1、如果物体作线性运动（或分布）有困难，则使物体在二维度(即平面)上移动。相应地，在一个平面上的运动(或分布)可以过渡到三维空间。

2、利用多层结构替代单层结构。

3、将物体倾斜或侧置。

4、利用指定面的反面。

5、利用投向相邻面或反面的光流。

十八、机械振动原则

1、使物体振动。

2、如果巳在振动，则提高它的振动频率(达到超声波频率)。

3、利用共振频率。

4、用压电振动器替代机械振动器。

5、利用超声波振动同电磁场配合。

十九、周期作用原则

1、从连续作用过渡到周期作用(脉冲)。

2、如果作用已经是周期的，则改变周期性。

3、利用脉冲的间歇完成其他作用。

二十、连续有益作用原则

1、连续工作(物体的所有部分均应一直满负荷工作)。

2、消除空转和间歇运转。

二十一、跃过原则

1、高速跃过某过程或其个别阶段(如有害的或危险的)。

二十二、变害为利原则

1、利用有害因素(特别是介质的有害作用)获得有益的效果。

2、通过有害因素与另外几个有害因素的组合来消除有害因素。

3、将有害因素加强到不再是有害的程度。

二十三、反向联系原则

1、进行反向联系。

2、如果已有反向联系，则改变它。

二十四、"中介"原则

1、利用可以迁移或有传送作用的中间物体。

2、把另一个(易分开的)物体暂时附加给某一物体。

二十五、自我服务原则

1、物体应当为自我服务，完成辅助和修理工作。

2、利用废料(能的和物质的)。

二十六、复制原则

1、用简单而便宜的复制品代替难以得到的、复杂的、昂贵的、不方便的或易损坏的物体。

2、用光学拷贝(图像）代替物体或物体系统。此时要改变比例(放大或缩小复制品)。

3、如果利用可见光的复制品，则转为红外线的或紫外线的复制。

二十七、用廉价的不持久性代替昂贵的持久性原则

1、用一组廉价物体代替一个昂贵物体，放弃某些品质(如持久性)。

二十八、代替力学原理原则

1、用光学，声学、 ‘味学"等设计原理代替力学设计原理。

2、用电场．磁场和电磁场同物体相互作用。

3、由恒定场转向不定场，由时间固定的场转向时间变化的场，由无结构的场转向有一定结构的场。

4、利用铁磁颗粒组成的场。

二十九、利用气动和液：压结构的原则

1、用气体结构和液体结构代替物体的固体的部分，如充气和充液的结构，气枕，静液的和液体反冲的结构。

三十、利用软壳和薄膜原则

1、利用软壳和薄膜代替一般的结构。

2、用软壳和薄膜使物体同外部介质隔离。

三十一、利用多孔材料原则

1、把物体作成多孔的或利用附加多孔元件(镶嵌，覆盖，等等)。

2、如果物体是多孔的，事先用某种物质填充空孔。

三十二、改变颜色原则

1、改变物体或外部介质的颜色。

2、改变物体或外部介质的透明度。

3、为了观察难以看到的物体或过程，利用染色添加剂。

4、如果已采用了这种添加剂，则采用荧光粉。

三十三、一致原则

1、同指定物体相互作用的物体应当用同一(或性质相近的)材料制成。

三十四、部分剔除和再生原则

1、已完成自己的使命或已无用的物体部分应当剔除(溶解．蒸发等)或在工作过程中直接变化。

2、消除的部分应当在工作过程中直接再生。

三十五、改变物体聚合态原则

1、这里包括的不仅是简单的过渡，例如从固态过渡到液态，还有向"假态"(假液态)和中间状态的过渡，例如采用弹性固体。

三十六、相变原则

1、利用相变时发生的现象，例如体积改变，放热或吸热。

三十七、利用热膨胀原则

1、利用材料的热膨胀(或热收缩)。

2、利用一些热膨胀系数不同的材料。

三十八、利用强氧化剂原则

1、用富氧空气代替普通空气。

2、用氧气替换富氧空气。

3、用电离辐射作用于空气或氧气。

4、用臭氧化了的氧气。

5、用臭氧替换臭氧化的(或电离的)氧气。

三十九、采用惰性介质原则

1、用惰性介质代替普通介质。

2、在真空中进行某过程。

四十、利用混合材料原则

1、由同种材料转为混合材料。

扩展资料：

现代TRIZ理论体系主要包括以下几个方面的内容：

1、创新思维方法与问题分析方法

TRIZ理论中提供了如何系统分析问题的科学方法，如多屏幕法等；而对于复杂问题的分析，则包含了科学的问题分析建模方法——物-场分析法，它可以帮助快速确认核心问题，发现根本矛盾所在。

2、技术系统进化法则

针对技术系统进化演变规律，在大量专利分析的基础上TRIZ理论总结提炼出八个基本进化法则。利用这些进化法则，可以分析确认当前产品的技术状态，并预测未来发展趋势，开发富有竞争力的新产品。

3、技术矛盾解决原理

不同的发明创造往往遵循共同的规律。TRIZ理论将这些共同的规律归纳成40个创新原理，针对具体的技术矛盾，可以基于这些创新原理、结合工程实际寻求具体的解决方案。

4、创新问题标准解法

针对具体问题的物-场模型的不同特征，分别对应有标准的模型处理方法，包括模型的修整、转换、物质与场的添加等等。

5、发明问题解决算法ARIZ

主要针对问题情境复杂，矛盾及其相关部件不明确的技术系统。它是一个对初始问题进行一系列变形及再定义等非计算性的逻辑过程，实现对问题的逐步深入分析，问题转化，直至问题的解决。

6、基于物理、化学、几何学等工程学原理而构建的知识库

基于物理、化学、几何学等领域的数百万项发明专利的分析结果而构建的知识库可以为技术创新提供丰富的方案来源。

-TRIZ理论

去痘清凉茶：金银花、生地、绿豆、黑豆各适量熬制，方法像煎药一样，三晚水熬一晚，一天服用两次，见效快，第二天就不怎么长了，而且之前长的不再恶化开始好转。

石斛生地茶

配方：

石斛9克、生地9克、熟地9克、天冬9克、麦冬9克、沙参9克、女贞子9克、茵陈9克、生杷叶9克、炒黄芩4克、炒枳实4克、西瓜汁100毫升

制作：

①把配方药物用纱布袋装好，扎紧口，放入锅内，加水800毫升，煎煮2次，每次20分钟，合并煎液，过滤，除去药渣。

②西瓜挖出瓤，用纱布绞出汁液，把药汁与西瓜汁混匀即成。

食法：

每日2次，每次饮100毫升。

适应症：

用于中消型糖尿病患者。证见能食善饥，身体消瘦，口干欲饮，头昏无力，腰痛，尿频，便秘。

功效：

清胃养阴，止渴通便

生地石膏茶

出处《千家妙方》

组成生地30克，石膏60克。

功用清热泻火，凉血滋阴。

主治①肺胃燥热、口渴引饮、多食善饥、形体消瘦、血糖升高者。②胃火亢盛所致头痛、齿痛、牙龈肿痛等证。③温病中期热盛伤阴、烦渴、吐血、衄血、舌红、脉数者。

制法取生石膏60克（打碎，布包），鲜生地3O克，加清水适量煎取什，代茶频饮。每日1剂。

宜忌阳虚体质及脾胃有湿邪蕴滞，表现纳少、舌苔白腻者忌服。

按语生地甘苦、寒，入心、肝、肾经，乃滋阴益肾之品，内、外各科常用于肾阴不足燥热偏胜之证。《圣济总录》用地黄治消渴。现代药理研究：地黄有明显的降血糖作用，《中医药信息》报导，以生地黄为主药的双补散胶囊——降糖通脉宁进行动物实验，结果均表明，降血糖效果明显。石膏性寒、味辛甘，具有清热泻火作用，善治气分实热、肺胃燥热之消渴证，以及热病烦渴。根据近年来的古方实验报导，“人参白虎汤”对四氧嘧啶糖尿病小鼠具有降血糖作用，其作用主要来自知母及人参，但仅以知母及人参合用，则出现相互拮抗，加入石膏则可协调二药而共同发挥良好的降血糖作用。可见石膏单味使用，其功用主要是清热除烦止渴，而配伍其它滋阴生津药，常可增强降血糖效果。中药方剂配伍之作用，还有待于进一步发掘。

生地羌独茶

组成人参10克，天门冬6克，干地黄15克。

功用养阴益气，润肺滋肾。

主治温热病后气阴两伤，睡卧不安，不思饮食，神志恍惚者；亦可用于肺结核或慢性支气管炎，迁延不愈，干咳无痰，咽燥口干，气短乏力者。

制法上药切成薄片或研粗末，置保温瓶中，以沸水3O0毫升冲泡，盖闷15分钟，代茶频饮。每日1剂。

宜忌脾胃湿热，食少，舌苔厚腻者忌用。

按语本方首见于《儒门事亲》，原为密丸剂。方各取三味药名的天、地、人之匹配，而名“三才”。方中天冬以补肺生水，人参以补脾益气，熟地以补肾滋阴，“使天地位育，参赞居中”，并补上中下之气阴。主治虚劳，气阴不足，咳嗽气短，精神不振。吴鞠通则以干地黄易熟地。治暑温气阴两伤之证。干地黄专于凉血润燥，病人虚而有热者尤为相宜。本方重在滋养肺肾气阴，适用于虚火证候，如为实火之证，则不可用。

枳术生地茶

出处《中医良药良方》

组成炒枳15克，炒臼术3O克，大生地3O～4O克。

功用健脾消积，养阴通便。

主治脾胃气阴两虚，饮食停滞，致大便秘结，脘腹痞满，不思饮食者。

制法按原方比例加大剂量，研成粗粉。每次取药5O～6O克，用纱布包，置保温瓶中，以沸水运量冲泡，盖闷15分钟后，频频饮用，1日内饮完。

宜忌实热便秘及寒积便秘者忌用。

按语本方所治，乃平素脾胃气阴两虚，饮食不慎停滞于胃肠所致之便秘、腹胀症。脾胃气阴不足则胃之受纳腐熟水谷之功能失常，牌之运化功能亦弱，加之饮食不慎积滞阻碍胃肠传导之气机，故出现便秘、脘腹痞满、不思饮食，加之胃阴不足，津液匿乏，则大便干结难出，方中以白术健脾助运，因“白术味苦而甘，既能燥湿实脾，更能缓牌生津。”合养阴生津之土地同用，共养脾胃气阴。辅以权实行气化积，消痞除满，寓消于补中。诸药合用，使牌健积消，邪去正复，则津液周流，而痞满、食少、便秘诸症自除。

大海生地茶

组成胖大海5枚、生地12克，冰糖30克，茶适量。

功用清肺利咽，滋阴生津。

主治慢性喉炎属肺阴亏虚者，如声音嘶哑，多语则喉中燥痒或有乾咳、喉部暗红，声带肥厚，甚则声门闭合不全，声带有小结，苔少舌红等。

制法上药共置热水瓶中，沸水冲泡半瓶，盖闷15分钟左右，不拘次数，频频代茶饮。根据患者的饮量，每日2～3剂。

宜忌本方甘寒而滞，易助湿，胖大海兼有清肠通便作用，故脾虚湿困，或素有大便溏薄者忌用。

按语胖大海，亦名安南子，性味甘寒，归肺、大肠经。有清肺利咽、清肠通便之功，是治疗咽喉疼痛、语音嘶哑的要药。生地甘苦而寒，既有清热凉血作用，又是滋阴生津的良品。茶叶降火利咽；冰糖生津润肺。四味同用，对於肺阴不足、虚火夹实之慢性喉炎而兼大便燥结者，用之最宜。

提取基因组DNA和细胞核DNA是不同的方法

提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核，要在甘油或其他保护剂中进行

SDS十二烷基磺酸钠：可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离

CATB是一种抽提液，破坏细胞膜的~具体忘了~

DNA不溶于异丙醇，异丙醇可以析出DNA，产生白色絮状沉淀，用枪头挑出就可以了

以下是一些具体方法，希望有用

基因组DNA提取方法

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法。2化学方式：异硫氰酸胍法,碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等

试验步骤：

1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。

2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。

3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/LTris-cl,01mol/LEDTA,o5%SDS),混匀。

4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀，50℃水浴3h,

5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相

6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀，冰浴，10min。

7、2500rpm离心10min转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。

2500rpm,离心10min。弃上清。

8、加入01倍体积3mol/L乙酸钠(PH52)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min,室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。

外周血DNA提取技术

分离外周血白细胞提取方法：

试验步骤：

1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。

2、小心吸取上层血浆，分装到3个05ml离心管中。

3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。

4、2500rpm离心10min，弃上清。

5、加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。

6、3000rpm离心10min，弃上清。

7、倒置离心管，去掉残液。

8、得白细胞，－80C冻存。

试验要求：

血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。

氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA：

试验试剂：

Ligsisbuffer：

133mMNH4ClNHCl712g09mMNH4HCO3NH4HCO30071g01mMEDTA05mMEDTA02ml；最后加灭菌去离子水至1000ml，高压灭菌。

ACD抗凝剂：柠檬酸168g柠檬酸钠462g葡萄糖515g；最后加灭菌去离子水至350ml，高压灭菌。

提取缓冲液（Extractionbuffer）：

10mMTrisCl(PH=80)1MTrisCl(PH=80)1ml01mMEDTA(PH=80)05mMEDTA(PH=80)20ml05%SDS10%SDS05ml；最后加灭菌去离子水至100ml，高压灭菌

试验步骤：

1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分颠混至清亮。以4000rpm，离心5min。弃上清液。

2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。以6000rpm，离心5min。

3、彻底弃去上清，加入extractionbuffer500μl（裂解细胞），混匀置于37℃，水溶1h。

4、加入8μl的蛋白酶K，颠混，37℃过夜（或55℃，3h，但是37℃效果要好些）。

5、每管加入450μl饱和酚（取溶液下层）缓慢摇晃10min，以5500rpm，离心15min。

6、取上清，每管加入250μl饱和酚和250μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。

7、取上清，每管加入500μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。

8、取上清，每管加50μl的3M的NaAC＋，适量无水乙醇（预冷）至满，摇匀放入-20℃保存2h以上。

9、以12000rpm，离心20min。去上清，加入70％乙醇500μl，以12000rpm，离心5min，去上清，50－60℃干燥。

10、加入50μl灭菌去离子水，转弹，混匀。

NaI提取法提取外周血白细胞基因组：

实验步骤：

1、取外周抗凝血（全血）100ul于eppendorf管中，12000rpm离心12min。

2、弃上清，加双蒸水200ul溶解，摇匀20s。

3、混匀后加6MNaI溶液200ul，摇匀20s。

4、加入氯仿/异戊醇（24：1）400ul，边加边摇，摇匀20s，12000rpm离心12min。

5、取上层液350ul，加入另一新eppendorf管中，加06倍体积异丙醇，摇匀20s，室温放置15min，静置后的反应体系15000rpm离心12min，使沉淀紧贴eppendorf管壁。

6、弃异丙醇，加70％乙醇1ml（不振动），以15000rpm离心12min。

7、弃乙醇，敞开eppendorf管盖，烘干（37℃恒温箱）后，加1xTE溶液30ul，溶解DNA＞12h以上，制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。

常用的外周血白细胞基因提取方法：

试验原理：

苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来。DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/LNaCl存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。

试验步骤：

1、将1mlEDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀，3500rpm离心15min,倾去含裂解红细胞的上清。重复一次。用07mlDNA提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。

2、将上述DNA提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml蛋白酶K02ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀，液体变粘稠。50℃水浴保温3h，裂解细胞，消化蛋白。保温过程中，应不时上下转动几次，混匀反应液。

3、反应液冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管5-10min，直至水相与酚相混匀成乳状液。5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿：异戊醇（24：1），上下转动混匀，5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复一次。

4、加入1/5体积的3mol/LNaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇，室温下慢慢摇动离心管，即有乳白色云絮状DNA出现。用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA，转入另一15ml离心管中，加70%乙醇02ml，以5000rpm离心5min。洗涤DNA，弃上清，去除残留的盐。重复一次。室温挥发残留的乙醇，但不要让DNA完全干燥。加TE液20ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动，DNA完全溶解通常需12-24h。制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。

真核细胞DNA的制备

一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等实验。

根据材料来源不同，采取不同的材料处理方法，而后的DNA提取方法大体类似，但都应考虑以下两个原则：

1、防止和抑制DNase对DNA的降解。

2、尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。

试剂准备：

1、TE:10mMTris-HCl(pH78);1mMEDTA(pH80)。

2、TBS:25mMTris-HCl(pH74);200mMNaCl;5mMKCl。

3、裂解缓冲液：250mMSDS;使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。

4、20%SDS

5、2mg/ml蛋白酶K

6、Tris饱和酚（pH80）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿

7、无水乙醇、75%乙醇

试验步骤：

材料处理：

1、新鲜或冰冻组织处理：

1)取组织块03-05cm3,剪碎，加TE05ml，转移到匀浆器中匀浆。

2)将匀浆液转移到15ml离心管中。

3)加20%SDS25ml，蛋白酶K(2mg/ml)25ml，混匀。

4)60°C水浴1-3hr。

2、培养细胞处理：

1)将培养细胞悬浮后，用TBS洗涤一次。

2)离心4000g×5min，去除上清液。

3)加10倍体积的裂解缓冲液。

4)50-55°C水浴1-2hr。

DNA提取：

1、加等体积饱和酚至上述样品处理液中，温和、充分混匀3min。

2、离心5000g×10min，取上层水相到另一15ml离心管中。

3、加等体积饱和酚，混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。

4、加等体积酚/氯仿，轻轻混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。如水相仍不澄清，可重复此步骤数次。

5、加等体积氯仿，轻轻混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。

6、加1/10体积的3M醋酸钠（pH52）和25倍体积的无水乙醇，轻轻倒置混匀。

7、待絮状物出现后，离心5000g×5min，弃上清液。

8、沉淀用75%乙醇洗涤，离心5000g×3min，弃上清液。

9、室温下挥发乙醇，待沉淀将近透明后加50-100mlTE溶解过夜。

植物组织中DNA的提取

试验原理：

脱氧核糖核酸（deoxribonucleicacid，DNA）是一切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细胞核中，盐溶法是提取DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA，即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。DNA不溶于014mol/L的NaCl溶液中，而RNA则能溶于014mol/L的NaCl溶液之中，利用这一性质就可以将二者从破碎细胞浆液中分开。制备过程中，细胞破碎的同时就有Dnase释放到提取液中，使DNA因被降解而影响得率，在提取缓冲液中加入适量的柠檬酸盐和EDTA，既可抑制酶的活性又可使蛋白质变性而与核酸分离，再加入阴离子去垢剂015％的SDS，经过2h搅拌，或用氯仿－异醇除去蛋白，通过离心使蛋白质沉淀而除去，得到的是含有核酸的上清液。然后用95％的预冷乙醇即可把DNA从除去蛋白质的提取液中沉淀出来。

植物DNA的SDS提取法：

试验试剂：

1、研磨缓冲液：称取5963gNaCl，1325g柠檬酸三钠，372gEDTA－Na分别溶解后合并为一，用02mol/L的NaOH调至pH70，并定容至1000ml。

2、10×SSC溶液：称取8766gNaCl和4412g柠檬酸三钠，分别溶解，一起定容至1000ml。

3、1×SSC溶液：用10×SSC溶液稀释10倍。

4、01×SSC溶液：用1×SSC溶液稀释10倍。

5、Rnase溶液：用014mol/LNaCl溶液配制成25mg/ml的酶液，用1mol/LHCl，pH至50，使用前经80℃水浴处理5min（以破坏可能存在的Dnase）。

6、氯仿－异戊醇：按24ml氯仿和1ml异戊醇混合。

7、5mol/L高氯酸钠溶液：称取NaClO4．H2O7023g，先加入少量蒸馏水溶解再容至100ml。

8、SDS（十二烷基硫酸钠）化学试剂的重结晶：将SDS放入无水酒精中达到饱和为止，然后在70～80℃的水浴中溶解，趁热过滤，冷却之后即将滤液放入冰箱，待结晶出现再置室温下凉干待用。

9、1mol／LHCl。

10、02mol/LNaOH。

11、二苯胺乙醛试剂：15g二苯胺溶于100ml冰醋酸中，添加15ml浓硫酸，装入棕色瓶，贮存暗处，使用时加01ml乙醛液〔浓乙醛：H2O＝1：50（V／V）〕。

12、10mol/L高酸溶液（HClO4）。

13、005mol/LNaOH。

14、DNA标准液：取标准DNA25mg溶于少量005molL-1NaOH中，再用005mol/LNaOH定容至25ml，后用移溶管吸取此液5ml至50ml容量瓶中，加50ml1mol/LHClO4，混合冷却后用05mol/LHClO4定容至刻度，则得100μg/ml的标准溶液。

实验步骤：

1、称取植物幼嫩组织10g剪碎置研钵中，加10ml预冷研磨缓冲液并加入01g左右的SDS，置冰浴上研磨成糊状。

2、将匀浆无损转入25ml刻度试管中加入等体积的氯仿－异戊醇混合液，加上塞子，剧烈振荡30s，转入离心管，静置片刻以脱除组织蛋白质。以4000rpm离心5min。

3、离心形成三层，小心地吸取上层清液至刻度试管中，弃去中间层的细胞碎片、变性蛋白质及下层的氯仿。

4、将试管置72℃水浴中保温3min（不超过4min），以灭活组织的DNA酶，然后迅速取出试管置冰水浴中冷却到室温，加5mol/L高氯酸钠溶液〔提取液：高氯酸钠溶液＝4：1（V／V）〕，使溶液中高氯酸钠的最终浓度为1mol/L。

5、再次加入等体积氯仿－异戊醇混合液至大试管中，振荡1min，静置后在室温下离心（4000rpm）5min，取上清液置小烧杯中。

6、用滴管吸95％的预冷乙醇，慢慢地加入烧杯中上清液的表面上，直至乙醇的体积为上清液的两倍，用玻璃棒轻轻搅动。此时核酸迅速以纤维状沉淀缠绕在玻璃棒上。

7、然后加入05ml左右的10×SSC，使最终浓度为1×SSC。

8、重复第6步骤和第7步骤即得到DNA的粗制品。

9、加入已处理的Rnase溶液，使其最后的作用浓度为50～70μg/ml，并在37℃水浴中保温30min，以除去RNA。

10、加入等体积的氯仿－异戊醇混合液，在三角瓶中振荡1min，再除去残留蛋白质及所加Rnase蛋白，室温下以4000rpm离心5min，收集上层水溶液。

11、再按6、7步骤处理即可得到纯化的DNA液。

植物DNA的CTAB提取法：

试验步骤：

1、称取新鲜叶片2-3g，剪碎放入研钵中，在液氮中研磨成粉末。

2、将粉末转移到加有7ml经预热的15×CTAB提取缓冲液15ml离心管中，迅速混匀后置于65℃水浴中，温育30min。

3、取出离心管,冷却至室温，加入氯仿/异戊醇(24:1)，充分混匀，室温下2300转离心20min。

4、将上清转移至另一新的15ml离心管中，加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇。充分混匀，2300rpm离心20min。

5、转移上清至另一新的15ml离心管中，加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液，轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。1000rpm离心10min，使DNA沉淀于管底。

6、加入15-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜。

7、待DNA完全溶解后，加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀，挑出DNA，置于15ml离心管中，用70%乙醇清洗30min。

8、离心机甩5s，倒出70%乙醇，再用95%乙醇浸泡5min，倒出95%乙醇，在超净工作台上吹干。

9、将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。

细菌DNA的提取方法

针对一些不易于提取的细菌的方法:

试验试剂：

抽提缓冲液：2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)（去色素）100mMTris-HCl(pH80)

25mMEDTA(pH80)20MNaCl

10MLiCl

2MLiCl

DEPC-water（抑制RNA酶活性）

3MNaAc(pH52)

96%乙醇

70%乙醇

试验步骤：

1、抽提缓冲液65℃预热。

2、加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min。

3、加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），振荡，以12,000rpm，离心10min。

4、取上清，加氯仿/异戊醇（24：1）振荡，以12,000rpm，离心10min。

5、重复再作一次步骤4。

6、加入1/10体积的3M醋酸钠和15倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20C下沉淀。

7、以2,000rpm，离心10min。

8、弃上清，以70％乙醇条洗沉淀，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml水中。

较为常用的细菌DNA提取方法：

实验步骤：

1、将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。

2、取15ml培养物12000rpm离心2min。

3、沉淀中加入567ul的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul10%SDS和15ul的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h

4、加入100ul5mol/LNaCl,充分混匀，再加入80ulCTAB/NaCl溶液，混匀后再65℃温育10min。

5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min,将上清转入一只新管中，加入06-08倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，沉淀可稍加离心。

6、沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇．

真菌DNA提取总结的两种方法：

第一种方法：

试验步骤：

1、取真菌菌丝05g,在液氮中迅速研磨成粉。

2、加入4mL提取液，快速振荡混匀。

3、加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚）。

4、以4℃，1000rpm，离心5min。

5、上清再用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次。以4℃，10,000rpm，离心5min。

6、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇或25倍体积的无水乙醇沉淀,混匀,静置约30min。

7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。

8、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃下处理1h。

9、用酚（pH80）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10,000rpm，离心5min。

10、取上清，加入1/10倍体积的3MNaAc,25倍体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。

11、沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ulTE中，-20℃保存备用。

DNA提取液：02MTris-HCl（pH75），05MNaCl，001MEDTA，1％SDS，3MNaAc。

第二种方法：

试验步骤：

1、真菌菌丝05-1g,在液氮中迅速研磨成粉。

2、加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30min,期间混匀2-3次。

3、加入1mL5MKAc，冰浴20min。

4、等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）。

5、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min。

6、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。

7、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃处理1h。

8、用酚（pH80）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10,000rpm，离心5min。

9、取上清，1/10V3MNaAc,25V体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。

10、沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ulTE中，-20℃保存备用。

植物基因组提取(CATB法)

作者：时间：2008-05-13 14:26:27 来源: 生物谷浏览评论

一、实验目的

掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。

二、实验原理

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。

十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。

三、实验材料

水稻幼叶

四、主要配方

2% CTAB抽提缓冲溶液: CTAB 4g NaCl 16364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH80) 05M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌, 冷却后02-1% 2-巯基乙醇（400ul）氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。

五、实验步骤

1 DNA的提取

（1） 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。

（2）取少量叶片（约1g）置于研钵中，用液氮磨至粉状；

（3）加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动；

（4）将磨碎液分倒入15 ml的灭菌中，磨碎液的高度约占管的三分之二；

（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，40 min后取出；

（6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3 min，使两者混合均匀；

（7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min，与此同时，将600 µl的异丙醇加入另一新的灭菌中；

（8） 10 000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的内，将离心管慢慢上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物；

（9）10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上；（10）60 sec后，直立离心管，加入720 µl的75%乙醇及80 µl 5 M的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中；

（11）放置30 min，使DNA块状物的不纯物溶解；

（12）10000 rpm离心1 min后，倒掉液体，再加入800 µl 75%的乙醇，将DNA再洗 30 min；

（13）10000 rpm离心30 sec后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）；

（14）加入50 µl 05 × TE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37℃恒温箱约15 h，使RNA消解；

（15）置于-20℃保存、备用。

2 DNA质量检测

琼脂糖电泳检测，原理和方法见实验二。

六、注意事项

（1）叶片磨得越细越好。

（2）移液器的使用。

（3）由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA降解。

是卧式砂磨机还是立式砂磨机，按照容量的比例70%添加，要看砂磨机的容量大小，选择锆珠的直径大小。分散盘带动研磨介质高速运动而产生摩擦和剪切，使物料得到研磨和分散。研磨室采用强制冷却。有卧式砂磨机及立式砂磨机之分，如圆筒形环隙式砂磨机和塔式砂磨机等。一般为湿式研磨。物料在旋转研磨盘作用下与研磨体混合并旋转，经与研磨体之间及与粉碎室各部分之间产生的研磨、剪切而粉碎。有卧式砂磨机及立式砂磨机之分，如圆筒形环隙式砂磨机和塔式砂磨机等。一般为湿式研磨。

基因组DNA提取原理及方法

一、原理

DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。

在酸性溶液中，DNA天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。要从细胞中提取DNA 时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖，RNA 及无机离子等，从中分离DNA 。 DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在014 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在014mol/L氯化钠中溶解度较大。因此，在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。

苯酚/氯仿作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态，真核细胞DNA的分离通常是在EDTA及SDS一类去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞获得。诸多生物试剂公司现已有各种类型DNA提取试剂盒出售。

二、材料及试剂

1 GENTRO DNA提取试剂盒

2 异丙醇

3 70％酒精

三、操作步骤

（一）、从全血中提取DNA

1 溶血：加300ul的肝素或EDTA二钠抗凝的全血到含RBC Lysis Solution 900ul 的15ml EP管, 室温静置1min,期间，轻轻颠倒混匀10次。13000 ~16000 g离心20s。

2 弃上清液，将管底的白色沉淀用枪头吹散，使白细胞在残留的液体中悬浮。

3 加300ul的Cell Lysis Solution于EP管中, 充分混匀。

4 加100ul的Protein Precipitation Solution于EP管中, 充分混匀,13000 ~16000g离心3min

5 取上清液，加300ul的异丙醇，充分混匀颠倒50次，可见白色絮状沉淀，13000 ~16000 g离心1min 。

6 弃上清液，加入70%的酒精500ul，13000~16000 g离心1min 。